2016年营养师考试三级考点精华:维生素D的测定
高效液相色谱法
1. 原理
样品中脂溶性维生素在皂化过程中与脂肪分离,以石油醚萃取后,用正相色谱柱提取富集,用反相色谱柱,紫外检测器定量测定。
2. 适用范围
本方法来源于GB/T 5413.9-1997。适用于婴幼儿配方食品和乳粉维生素A、维生素D、维生素E的测定;也适用于食品或强经食品及饲料中的维生素D含量的测定。
3. 主要仪器
1) 高压液相色谱仪,具有可变波长的紫外检测器,数据处理系统或记录仪。
2) 旋转蒸发器。
3) 平底烧瓶:250mL。
4) 分液漏斗:500mL。
4. 试剂
所有试剂,如未注明规格,均指分析纯,所实验用水均指蒸馏水。
1) 异丙醇:色谱纯。
2) 2%焦性没食子酸乙醇溶液:取2g焦性没食子酸溶液于100mL无水乙醇中。
3) 75%氢氧化钾溶液:取75g氢氧化钾溶于100mL水中。
4) 石油醚:沸程30~60℃。
5) 甲醇:色谱纯。
6) 正己烷:色谱纯。
7) 环己烷:色谱醇。
8) 维生素D标准溶液
A. 维生素D2标准贮备液:含维生素D2100mg/ml的甲醇溶液。称取10mg的维生素D2,用甲醇定容于100mL容量瓶中。
B. 维生素D3的标准贮备液:含维生素D3100mg/ml的甲醇溶液。称取10mg的维生素D3,用甲醇定容于100mL容量瓶中。
5. 操作步骤
5.1样品处理:准确称取10g样品,于250mL平底烧瓶中,加30mL蒸馏水。
5.2测定液的制备:
1) 于上述样品溶液中加入100mL的20%没食子酸乙醇溶液,充分混匀后加50mL75%氢氧化钾溶液,在蒸汽浴上边续回流30min后,立刻冷却到室温。
2) 将皂化液转入一500mL分液漏斗中,用100mL水分几次冲平底烧瓶。洗涤液并入分液漏斗中。
3) 于上述分液漏斗中,加入100mL石油醚,盖好瓶塞,倒置分液漏斗并剧烈振摇1 min.在振摇过程中,注意释放瓶内压力。静置分层,将水相放入另一500mL分液漏斗中,重复上棕萃取过程2次,合并醚液到第一个分液漏斗中。用蒸馏水洗该醚液至中性,通过无水硫酸钠过滤干燥,在40℃和氮气流下,于旋转蒸发器上蒸至近于(绝不允许蒸干)后,用石油醚转移至10mL容量瓶中,定容。
4) 从上述容量瓶中取7mL放入一试管中,用氮气将石油醚吹干,于试管中加1mL正己烷。
5.3测定:
1) 测定液的制备:
A) 仪器条件:
色谱柱:30cm×40cm,硅胶柱。
流动相:正己烷与环己烷按体积比1:1混合,并按体积分数0.8%加入异丙醇。
流速:1mL/min。
波长:265nm。
柱温:20℃。
灵敏度:0.005AU/MV。
注射体积:200mL。
B) 注射50mL维生素D标样和200mL样品溶液,根据维生素D标样保留时间收集维生素D于试管中,将试管用氮气吹干,准确加入0.2mL甲醇溶解。
2) 测定步骤:
A) 仪器条件:
色谱柱:4.6mm×25cm,C18或具同等性能的色谱柱。
流动相:甲醇。
流速:1mL/min。
波长:265nm。
柱温:20℃。
灵敏度:0.005AU/MV。
注射体积:50mL。
B) 注射50mL维生素D标准溶液,注射50mL样品溶液,得到标样和样品溶液中维生素D峰面积或峰高。
6. 计算
ρs×10∕7×40×100
X =
m
As
ρs= ---×ρsd
Asd
式中: X--样品维生素D的量,mg/100g;
m--称样量,含量,IU∕100g;
ρs --进样液中维生素D有浓度,mg/mL;
A s --进样液中维生素D有峰高(或峰面积);
A s d --标样液中维生素D有峰高(或峰面积);
ρsd --标样中维生素D的浓度;
计算结果精确至小数点后一位。
7. 注意事项
1) 允许误差及最小检出量:同一样品的2次测定值之差不得超过2次测定平均值的10%;最小检出量为0.1国标单位。
2) 试剂焦性没食子酸容易变性,应购习近期生产的试剂。
3) 如果皂化不完全,可适当增加氢氧化钾的加入量。
热推:各地2016年公共营养师报名时间及入口 公共营养师考试在线题库_手机题库 代报名时间专题
小编推荐:2016年公共营养师真题及答案 成绩查询时间 报考完全指南 考试时间11月20日
1 | 点击查看>>>>2016营养师考试应试技巧_模拟训练_网络课程 |
2 | 点击查看>>>>不要走弯路——2016公共营养师考前2个月备考方案 |
3 | 点击查看>>>>2016公共营养师考试在线题库_手机题库_下载 |
2016年公共营养师精品班套餐:导师团队精讲章节,解析大纲、总结考点,准确把握考试命脉,高分取证!套餐特色:考试大纲解析, 详解知识章节, 重点高度总结,考点一次把握,协助 代 报考,省去繁琐流程,免费在线模考,检验学习效果,导师在线答疑,及时高效解惑, 课件免费下载,随心自在学习.
>>>>2016年公共营养师精品班套餐 取证+就业 双证班 临考套餐<<<< |
一级建造师二级建造师消防工程师造价工程师土建职称公路检测工程师建筑八大员注册建筑师二级造价师监理工程师咨询工程师房地产估价师 城乡规划师结构工程师岩土工程师安全工程师设备监理师环境影响评价土地登记代理公路造价师公路监理师化工工程师暖通工程师给排水工程师计量工程师
执业药师执业医师卫生资格考试卫生高级职称执业护士初级护师主管护师住院医师临床执业医师临床助理医师中医执业医师中医助理医师中西医医师中西医助理口腔执业医师口腔助理医师公共卫生医师公卫助理医师实践技能内科主治医师外科主治医师中医内科主治儿科主治医师妇产科医师西药士/师中药士/师临床检验技师临床医学理论中医理论